Белок G-сефароза

Компания Биалекса предлагает аффинный носитель для очистки моно- и поликлональных антител, приготовленный на основе Sepharose CL4B c ковалентно связанным белком G. Белок G обладает высоким сродством к константным участкам молекулы иммуноглобулинов класса G различных млекопитающих. Благодаря этому белок G широко используется для выделения поли- и моноклональных антител из разного рода образцов, таких, как сыворотка крови, культуральная среда, асцитная жидкость и т.п. Носитель также может быть использован для преципитации комплексов антиген-антитело из раствора.

Матрица. Для создания носителя используется сефароза CL4В (Pharmacia), представляющая собой кросс-сшитую агарозу (4%-ная кросс-сшивка). Данный тип агарозы является оптимальной матрицей для приготовления аффинных носителей путем ковалентной иммобилизации различных лигандов. Сефароза CL4B и носители, приготовленные на ее основе, отличается высокой стабильностью, механической прочностью, стойкостью к разного рода химическим агентам, в том числе к органическим растворителям.

Белок G. Белок G, интегральный белок клеточной стенки стрептококков групп G и С, способен с высокой эффективностью и избирательностью обратимо связывать иммуноглобулины млекопитающих. Для создания аффинного носителя компания Биалекса использует рекомбинантный белок G с высоким сродством и ёмкостью (одна молекула белка G связывает три молекулы иммуноглобулинов) взаимодействующий с иммуноглобулинами различных видов животных.

Метод иммобилизации. Белок G ковалентно иммобилизован на сефарозе, активированной бромцианом. Плотность иммобилизации: 3 мг белка G на 1 мл сефарозы.

Хранение. Носитель поставляется в фосфатно-солевом буфере с 0,1% азидом натрия (NaN₃). Срок хранения – не менее 2 лет при +4-8°С.

Чистота получаемых препаратов

Носитель прост в использовании и позволяет в одну стадию очистки получать высокоочищенные препараты иммуноглобулинов G различного происхождения.

а                              б                               в                                 г                                д

Выделение иммуноглобулинов. Анализ фракций методом ДСН-ЭФ в 12,5% ПААГ (восстанавливающие условия). 1 – до очистки; 2 – после очистки.
а) плазма крови, фракция иммуноглобулинов G человека; б) асцитная жидкость, моноклональные мышиные антитела; в) сыворотка крови, поликлональные козьи антитела; г)  культуральная среда, рекомбинантные гуманизированные моноклональных антитела; д) культуральная среда, рекомбинантные Fab-фрагменты моноклональных антител

Ёмкость носителя

Носитель обладает высокой ёмкостью по отношению к моно - и поликлональным антителам различного происхождения.

* Ёмкость указана для конкретных клонов антител. Ёмкость носителя может быть различной для различных клонов.

Стабильность носителя

При соблюдении правил работы с носителем на одном и том же образце белок G-сефарозы можно проводить более 100 циклов очистки иммуноглобулинов. Носитель стабилен в диапазоне рН 2.0‑8.0, а также к воздействию широкого спектра денатурирующих агентов.